接种、分离纯化和培育技术

一、接种

将微生物接到适于它成长繁衍的人工培育基上或活的生物体内的进程叫做接种。

1、接种东西和办法

  在试验室或工厂实践中,用得**多的接种东西是接种环、接种针。由于接种请求或办法的不一样,接种针的针尖部常做成不一样的形状,有刀形、耙形等之分。有时滴管、吸管也可作为接种东西进行液体接种。在固体培育基外表要将菌液均匀涂布时,需求用到涂布棒。(图3-3) 

图3-3 接种和别离东西

1.接种针 2.接种环 3.接种钩 4.5.玻璃涂棒 6.接种圈 7.接种锄 8.小解剖刀

   

  常用的接种办法有以下几种:

  1)划线接种 这是**常用的接种办法。即在固体培育基外表作来回直线形的移动,就可到达接种的效果。常用的接种东西有接种环,接种针等。在斜面接种和平板划线中就常用此法。

  2)三点接种 在研讨霉菌形状经常用此法。此法即把少数的微生物接种在平板外表上,成等边三角形的三点,让它各自独立构成菌落后,来调查、研讨它们的形状。除三点外,也有一点或多点进行接种的。

  3)穿刺接种 在保藏厌氧菌种或研讨微生物的动力经常选用此法。做穿刺接种时,用的接种东西是接种针。用的培育基通常是半固体培育基。它的做法是:用接种针蘸取少数的菌种,沿半固体培育基中心向管底作直线穿刺,如某细菌具有鞭毛而能运动,则在穿刺线周围能够成长。

  4)浇混接种 该法是将待接的微生物先放入培育皿中,然后再倒入冷却**45°C摆布的固体培育基,敏捷轻轻摇匀,这么菌液就到达稀释的意图。待平板凝结以后,置适宜温度下培育,就可长出单个的微生物菌落。

  5)涂布接种 与浇混接种略有不一样,即是先倒好平板,让其凝结,然后再将菌液倒入平板上面,敏捷用涂布棒在外表作来回摆布的涂布,让菌液均匀分布,就可长出单个的微生物的菌落。

  6)液体接种 从固体培育基中将菌洗下,倒入液体培育基中,或许从液体培育物中,用移液管将菌液接**液体培育基中,或从液体培育物中将菌液移**固体培育基中,都可称为液体接种。

  7)打针接种 该法是用打针的办法将待接的微生物转接**活的生物体内,如人或其它动物中,多见的疫苗防止接种,即是用打针接种,接入人体,来防止某些疾病。

  8)活体接种 活体接种是专门用于培育病毒或其它病原微生物的一种办法,由于病毒有必要接种于活的生物体内才干成长繁衍。所用的活体可所以全部动物;也可所以某个离体活安排,例如猴肾等;也可所以发育的鸡胚。接种的办法是打针,也可所以拌料喂食。

2、无菌操作

  培育基经高压灭菌后,用经过灭菌的东西(如接种针和吸管等)在无菌条件下接种含菌资料(如样品、菌苔或菌悬液等)于培育基上,这个进程叫做无菌接种操作。在试验室查验中的各种接种有必要是无菌操作。

  试验台面不管是什么资料,一概请求润滑、水平。润滑是便于用消毒剂擦拭;水平是倒琼脂培育基时利于培育皿内平板的厚度保持一致。在试验台上方,空气活动应缓慢,杂菌应尽量削减,其周围杂菌也应越少越好。为此,有必要打扫室内,封闭试验室的门窗,并用消毒剂进行空气消毒处理,尽可能地削减杂菌的数量。

  空气中的杂菌在气流小的状况下,跟着灰尘落下,所以接种时,翻开培育皿的时刻应尽量短。用于接种的用具有必要经干热或火焰等灭菌。接种环的火焰灭菌办法:通常接种环在火焰上充沛烧红(接种柄,一边滚动一边慢慢地来回经过火焰三次),冷却,先触摸一下培育基,待接种环冷却到室温后,方可用它来挑取含菌资料或菌体,敏捷地接种到新的培育基上。(图3-4)然后,将接种环从柄部**环端逐步经过火焰灭菌,恢复。不要直接烧环,避免残留在接种环上的菌体爆溅而污染空间。平板接种时,通常把平板的面歪斜,把培育皿的盖翻开一小部分进行接种。在向培育皿内倒培育基或接种时,试管口或瓶壁外面不要触摸底皿边,试管或瓶口应歪斜一下在火焰上经过。

二、别离纯化

  富含一种以上的微生物培育物称为混和培育物(Mixed culture)。假如在一个菌落中所有细胞均来自于一个亲代细胞,那么这个菌落称为纯培育(Pure culture)。在进行菌种鉴守时,所用的微生物通常均请求为纯的培育物。得到纯培育的进程称为别离纯化,办法有许多种。

1、倾泻平板法

  首要把微生物悬液经过一系列稀释,取必定量的稀释液与熔化好的保持在40~50°摆布的养分琼脂培育基充沛混合,然后把这混合液倾泻到无菌的培育皿中,待凝结以后,把这平板倒置在恒箱中培育。单一细胞经过屡次增殖后构成一个菌落,取单个菌落制成悬液,重复上述过程数次,便可得到纯培育物。(图3-5,a)

1.菌悬液 2.熔化的培育基 3.培育物 4.无菌水

2、涂布平板法

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