用于微生物分析的培养基制备的SOP

1.0目标

制定媒体准备程序。

2.0范围

本标准操作程序适用于微生物学部分的培养基制备。

3.0责任

微生物学家

4.0问责制

质量检查和质量控制主管

5.0程序

5.1微生物培养基的制备和使用方法

5.1.1使用Hi-Media的脱水培养基。在使用媒体之前,请先检查内部使用日期。
5.1.2包装上提供了准备介质的方法。它给出了每升注射用水要悬浮的粉末量。
5.1.3称量所需量的粉末,并添加所需量的新鲜收集的WFI。记下重量,充分混合以溶解,并在灭菌前检查培养基的pH值。按照包装上的说明消毒介质。高压灭菌后;让介质冷却至55-60°C,在约55±5°C的温度下存放或根据要求倒入板中。
5.1.4此存储的媒体可以使用7天。保持记录媒体准备的使用和格式破坏。

5.1.5肉汤培养基

5.1.5.1称重脱水培养基的量,并根据包装上的说明添加WFI。记下每种介质的重量。
5.1.5.2将固体溶解在WFI中,轻轻加热(如有必要)以形成均匀的溶液,冷却至室温并通过使用0.1 M HCl或0.1M NaOH溶液调节所需的pH(在各个介质包装上指定)。
5.1.5.3在适当的烧瓶或试管中分配适量的培养基。用不吸水的棉布塞好,再用铝箔纸包好。
5.1.5.4按照包装上的说明消毒培养基。高压灭菌应在121°C,15磅/英寸²的条件下进行20分钟或相应介质指定的时间。
5.1.5.5灭菌后,将培养基冷却至室温,使用pH指示条或pH计再次检查pH并进行分析。
5.1.5.6将灭菌的肉汤培养基保存在25°C以下直至使用。

5.1.6琼脂培养基

5.1.6.1按照培养基包装上给出的方向称量WFI中脱水培养基的量。记下每种介质的重量。
5.1.6.2将固体溶解在WFI中,轻轻加热(如果需要)以形成均匀的溶液,冷却至室温,使用0.1 M HCl或0.1 M NaOH溶液调节所需的pH(在相应的介质包装上指定)。
5.1.6.3在适当的烧瓶中分配适量的培养基。用不吸水的棉布塞好,再用铝箔纸包好。
5.1.6.4按照包装上的说明消毒培养基。高压灭菌应在121°C,15磅/英寸²的条件下进行20分钟或相应介质指定的时间。
5.1.6.5灭菌后,将介质冷却至60ºC。
5.1.6.6将熔融介质存放在保持在55-60ºC的烤箱中,直至进一步使用。
5.1.6.7在某些情况下,例如亚硒酸盐半胱氨酸肉汤,请勿对溶液进行高压灭菌。制备溶液后,按照培养基包装上给出的灭菌步骤进行。然后冷却至室温并使用。
5.1.6.7对于琼脂培养基,高压灭菌后,将其冷却至约45-50°C,然后将培养基无菌倒入无菌培养皿中,每盘15至20 ml。使这些板固化。关闭板,将其倒置并保存在BOD培养箱中(低于25°C)。
5.1.6.8**中准备的所有介质应分配相应的批号。这些批号 应在媒体准备,实用程序和销毁记录中输入。

5.2分配批号

在一个高压灭菌循环中准备的所有介质应具有各自的批号,并且应将这些批号输入到介质准备和记录中。应按以下方式分配高压灭菌介质的批号:
XXX / ZZZZZ
其中XXX:每年高压灭菌器装载号,从001开始。
ZZZZZ:制造商提供的介质批号。
在2小时内对微生物培养基进行灭菌。从他们的准备。

5.3微生物培养基的储存

准备的培养基:
肉汤:存放于25°C以下。
熔融琼脂培养基:在55-60°C之间储存
制备的板:在25°C以下在BOD中储存

5.4媒体测试:

5.4.1 pH:在一次运行中,从各种营养培养基中制备一次,高压灭菌后取样,然后冷却至室温。用电极测量固体介质(固化前)和液体介质的pH值。记录结果。如果测得的pH值不符合要求,则为同一批次的另外两个容器确定pH值。如果两次重复的结果均在限值范围内,则可以将中等批次的样品用于测试。如果结果不符合要求,则不得使用该批次并将其丢弃。

5.4.2预孵育

将培养基预孵育48小时。孵育后,对介质进行物理检查以检查是否存在任何污染(宏观证据的增长),如果存在污染,请按照SOP丢弃所有介质以弃置介质。

5.4.3促进生长的性质

根据SOP,使用指示生物测试选择性和非选择性培养基的促生长特性。

6.0缩写

SOP:标准操作程序
QA:质量保证
QC:质量控制
BOD:生物需氧量
M:摩尔比
WFI:注射用水