干热灭菌效果的监测

 

在医院和生物实验室所使用的干热灭菌设备主要是电干热干烤箱和远红外线干烤箱。对干热灭菌效果监测比较简单,主要有两种手段。在使用中按以下要求进行。
 
  (一)工艺监测
 
  1. 保证足够的温度与时间  干热灭菌在一定的温度下保持足够的时间,如160℃、120min\170℃60min\180℃、30min。
 
  2. 灭菌物品必须清洁干燥  干热穿透性不强、不干净的物品容易造成灭菌不彻底。
 
  3. 合适的包装 干热灭菌物品的包装材料首先能耐高温,金属传导型烤箱内不适宜放大件包装,对流型烤箱对包装大小不太严格,但亦不能高于烤箱高度的2/3。
 
  4. 正确摆放   干热灭菌箱内物品摆放应安排有序,不能杂乱无章,装量不能过满,应留有一定的空隙。
 
(二)、干热灭菌效果监测办法
 
  1、化学监测法
 
  (1)、检测方法:将既能指示温度又能指示温度持续时间的化学指示剂3个~5个分别放入待灭菌的物品中,并置于灭菌器最难达到灭菌的部位。经一个灭菌周期后,取出化学指示剂,据其颜色及性状的改变判断是否达到灭菌条件。
 
  (2)、结果判定:检测时,所放置的指示管颜色及性状均变至规定的条件,则判为达到灭菌条件;若其中之一未达到规定的条件,则判为未达到灭菌条件。
 
  (3)、注意事项:检测所有的化学指示剂需经卫生部认可,并在有效期内使用。
 
  2、生物指示剂检测法
 
  (1)、生物指示剂指示菌株:枯草杆菌黑色变种芽孢(ATCC9372),菌片含量为5.0×105 cfu/片~5×106cfu/片。其抗力应符合以下条件:在温度160℃±2℃时,其D值为1.3~1.9min,存活时间≥3.9min,杀灭时间≤19min。
 
  (2)、检测方法:将枯草杆菌芽孢菌片分别装入灭菌试管内(1片/管)。灭菌器与每层门把手对角线内,外角处放置2个含菌片的试管,试管帽置于试管旁,关好柜门,经一个灭菌周期后,待温度降至80℃时,加盖试管帽后取出试管。在无菌条件下,加入普通营养肉汤培养基(5ml/管),以36℃±1℃培养48h,观察初步结果,无菌生长管继续培养至第七日。
 
  (3)、结果判定:若每个生物指示菌片接种的肉汤管均澄清,判为灭菌合格,若指出菌片之一接种的肉汤管混浊,判为不合格,对难以判定的肉汤管,取0.1ml接种于营养琼脂平板,用灭菌L 棒涂匀,放36℃±1℃培养48h,观察菌落形态,并做涂片染色镜检,判断是否有指示菌生长,若有指示菌生长,判为不合格;若无指示菌生长,判为灭菌合格。
 
  (4)、注意事项:检测所有的生物指示菌片需经卫生部认可,并在有效期内使用。
 
  干热灭菌效果的生物监测亦为国际标准菌株制备的的生物指示剂,即通用枯草杆菌黑色变种芽孢ATCC9372,用该细菌芽孢悬液定量沾染在特定(0.5cm×2.0cm)滤纸上,制成的干燥菌片,每片装入一个透气性纸袋内,这种芽孢菌片对干热的标准抗力:在160℃干热条件下染菌量为5×105~5×106cfu/片,D值1.3~1.9min。
 
  监测时将菌片放于玻璃平皿内,分布与上中层中央和底层内中外等5个点,每点两片;也可直接布放于不同位置的灭菌包内。待灭菌结束时温度冷却时取出,在无菌室内于无菌条件下将菌片接种到营养汤管内,于37℃温箱内培养72h观察结果,当肉汤出现浑浊表示有菌生长,判定为灭菌不合格;肉汤仍然清澈透明则表示无菌生长,判定为灭菌合格。
 
  每次监测设备必须设阳性对照并且应生长正常。

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