消毒与灭菌常用方法

(一)干热灭菌
【原理】
高温对细菌有明显的致死作用,主要机理是凝固菌体蛋白质,也可能与细菌DNA单螺旋断裂、细菌膜功能受损及菌体内电解质浓缩有关。干烤箱为常用的干热灭菌器,其杀菌作用是通过脱水干燥和大分子变性完成的。
【构造】
干烤箱是中间夹着石棉的双层金属制成的方形或长方形箱,箱底装有热源,箱内有数层金属架,并附有温度计和自动温度调节器等装置。把待灭菌的物件均匀地放入恒温干燥箱,加热**160℃~170℃维持2小时即可达灭菌目的。
【使用方法及注意事项】
1.将包扎好的待灭物品(培养皿、吸管器等)放于箱内,注意不要摆得太挤,以免妨碍气流流通。
2.关门,插上电源插头(常为220伏),拨动开关,旋动恒温调节器,**红灯亮。
3.待温度上升160℃~170℃时,借恒温调节器的自动控制,保持此温度2小时。
4.灭菌后停止加热,待温度下降**40℃以下方可开门取物,在这之前切勿自行打开箱门,否则其内物品(如玻璃器皿等)会因温度骤然下降而爆裂。
【应用】
干热灭菌主要用于要求干燥的、耐高温的物品灭菌,如玻璃器材、瓷器、凡士林、液体石蜡、药粉等的灭菌。一般不耐高温的、含有水份的物质,不能用这种方法灭菌。

(二)湿热灭菌
【原理】
高温对细菌有明显的致死作用,主要机理是凝固菌体蛋白质,也可能与细菌DNA单螺旋断裂、细菌膜功能受损及菌体内电解质浓缩有关。湿热灭菌所需温度较低,时间较短(表3-2)。特别是高压蒸气灭菌,因增加压力而提高温度,灭菌效果**佳。其主要优点是:①温度较高,灭菌所需时间较短;②蒸气穿透力强;③蒸气冷凝时释放汽化热,能迅速提高物品的温度;④物品不过分潮湿。
表3-2 热力消毒灭菌法比较
方法    温度(℃)    时间(min)    灭菌器    适用物品
焚烧    >500    瞬时        废弃物品、动物尸体灭菌
干烤    160~170    120    干热灭菌器(干烤箱)    玻璃器材、瓷器等灭菌
巴氏消毒法    61.1~62.8
71.7    30
15-30s        牛奶、酒类等消毒
煮沸消毒法    100    5        食具、刀剪、注射器等消毒
流通蒸气消毒法    100    15~30    Arnold流通蒸气灭菌器    食具等消毒
间歇灭菌法    100    30    流通蒸气灭菌器(重复3次)    不耐高温的含糖、牛奶等培养基
高压蒸气灭菌法    121    15~30    高压蒸气灭菌器    耐高温、高压及不怕潮湿的物品
高压蒸气灭菌器是目前应用**广泛、灭菌效果**好的灭菌器具,其种类有手提式、直立式、横卧式等。它们的构造及灭菌原理基本相同。高压蒸气灭菌方法的原理是水在大气中100℃左右沸腾,水蒸气压力增加,沸腾时温度将随之增加,因此,在密闭的高压蒸气灭菌器内,当压力表指示蒸气压力增加到15磅(1.05kg/cm)时,温度则相当于121.3℃,在这种温度下20min即可完全杀死细菌的繁殖体及芽胞。
【构造】
高压蒸汽灭菌器有各种形式及规格。下面以常用的高压蒸汽灭菌锅为例进行介绍。高压蒸汽灭菌锅是一个密闭的耐高温和耐高压的双层金属圆筒,两层之间盛水。
①外锅:供装水产生蒸汽之用。坚厚,其上方或前方有金属厚盖,盖有螺栓,借以紧闭盖门,使蒸汽不能外溢。加热后,灭菌器内蒸汽压力升高,温度也随之升高,压力越大,温度越高。
外锅壁上还装有排气阀、温度计、压力表及安全阀。排气阀用于排出空气;压力表:以表示锅内压力及温度(公制压力单位为公斤/cm2、英制压力单位磅/英寸2、温度单位℃);安全阀又称保险阀,利用可调弹簧控制活塞,超过定额压力即自行放汽减压,以保证在灭菌工作中的安全。
②内锅:为放置灭菌物的空间。

【使用方法及注意事项】
1.使用前的准备:灭菌器内清洗干净,检查进气阀及排气阀是否灵活有效,并加入适量水。
2.装放灭菌物:将待灭菌的物品放入灭菌器内,注意不要放得太挤,以免影响蒸汽的流通和灭菌效果。然后加盖旋紧螺旋,密封。
3.预热及排气:加热升温使水沸腾,并由小**大打开排气管(排气阀),排除冷空气,继续加热升温,再关闭排气管(阀)。
4.升压保温:让温度随蒸汽压力增高而上升待压力逐渐上升,待蒸汽压力升**所需压力(一般为103.43kPa,温度则相当于121.3℃)时,控制热源,维持所需时间,持续15~20min即可达到灭菌目的。
5.降压开盖取物:保压到规定时间之后,就停止加热,缓缓排气,待其压力下降**零时,方可开盖取物。
6.注意事项
⑴此法灭菌是否彻底的一个关键是压力上升之前,必须先把蒸汽锅内的冷空气完全驱尽,否则,即使压力表已指到103.43kPa,而锅内温度则只有100℃,这样芽孢则不能被杀死,造成灭菌不彻底,所以必须进行排气。
⑵降压一般通过自行冷却。如果时间来不及,可以稍开排气阀降压,但排气阀不能开得太大,排气不能过急,否则灭菌器内骤然降压,灭菌物内的液体会突然沸腾,将棉塞冲湿,甚**外流。另外,降压时压力表上读数虽已降**“0”时,灭菌物内温度有时还会在100℃以上,如果开锅太快还有沸腾的可能,所以**好在降压后再稍停一会,灭菌物温度下降后再出锅较妥当。灭菌物灭菌后仍处于高温时,容器内呈真空状,降温过程中外部空气要重新进入容器。一般叫“回气”,降温过快,回气就急,如棉塞不严密,空气中杂菌就会重新进入灭菌物使其污染,这往往造成高压蒸汽灭菌的失败。因而降压开盖取物不宜过急。

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